Paraffin and Plastic Techniques for Preparation of Bone Marrow Specimen 

Karen Noe, B.S., HTL (ASCP) 
Muhlenberg Regional Medical center 
Plainfield, NJ 07060  

 

Handling of Bone Marrow 

Aspirated Marrow Units: 

1. On the floor, about 5ml of marrow aspirate is placed into lavender top B-D vacutainer containing 0.07 ml 15% EDTA and mix the contents quickly and thoroughly.
2. After arriving in the laboratory, the contents of the B-D tube are then filtered through either templefiber or Histowrap recovering only units.
3. The units are wrapped in templefiber or Histowrap and placed in a bottle containing working B-5 Fixative. The units are fixed for 1 hour.
4. The wrapped units are placed in a plastic processing cassette (do not use metal) and stored in 70% ethyl alcohol until processing. 

Needle Biopsy of the Marrow: 

1. On the floor the biopsy material is placed in a bottle working B-5 fixative. 
2. After arriving in the laboratory, the biopsy is fixed in a minimum of 30 minutes; 1 hour preferable. 
3. After fixation, rinse the biopsy in tap water. 
4. The specimen is placed in RDO decalcifying solution for 15-30 minutes. 
5. When the decalcification is completed, the specimen is wrapped in lens paper, placed in a plastic bag processing cassette (no metal) and washed in running tap water for 30 minutes. 
6. Process as usual 

 

Bone Marrow Biopsies

By Becky Scholes, HTL, MT (ASCP) 

Aspirate: 

1. Allow aspirate to clot in Petri dish. 
2. Transfer clot to specimen container filled with 10% buffered formalin. 
3. Process as usual. 

 

Bone Core Fixation: 

1. Immediately fix in acetic formalin for a minimum of one hour. 
2. Fix overnight if brought in later than 2 hours before end of the work day.  Decalcify first thing in the morning. 

 

Acetic Formalin 

80% ethanol	900cc
Conc. Formalin	100cc
Acetic acid	50cc

 

Dilute RDO 

Distilled water	1 part
RDO	3 parts

 

Bone Core Decalcifications: 

1. Place fixed core and label in a plastic cassette (RDO discolors metal). Decalcify in dilute RDO for 1 hour.  Do not leave overnight. 
2. Test for decalcification by gently checking for pliability.
3. Rinse in running tap water for approximately 2 minutes. 

Processing: 

1. If biopsy came in afternoon, process with the rest of the specimens. 
2. If the biopsy is decalcified in the morning, hand process in 120cc plastic specimen cups,
3. 15 minutes in each container, starting with 70% ethanol or speed process through processor,
4. 15 minutes each station with heat and vacuum, starting with the first dehydrant station. 

 

Microtoming: 

1. Cut both aspirate and bone cores at 2 microns. 
2. Place 3 levels on one slide.  Cut an extra slide of the last level and set aside on the back of the water bath in case a special stain is requested. 

 

Staining: 

1. Hematoxylin approximately 5 minutes.  Bone core 1 minute (check under the microscope before counterstaining). 
2. Eosin for 10 dips, dehydrate, clear and coverslip. 

 

Discussion: 

Over decalcification will result in poor or indifferent histological detail and staining characteristics.  Less than one hour is usually not sufficient.